Treffer: Using live-cell protein micropatterning to determine the size of plasma membrane proteins ; Verwendung von Protein Micropatterning zur Bestimmung der Größe von Plasmamembran-Proteinen in lebenden Zellen

Abweichender Titel nach Übersetzung der Verfasserin/des Verfassers ; Die zelluläre Plasmamembran ist ein hoch komplexes, dynamisches System bestehend aus einer Vielfalt an Lipiden und Proteinen, die miteinander aber auch mit ihrer Umgebung z.B. über Liganden wie Hormone oder Antigene, wechselwirken. Da viele zelluläre Funktionen und Prozesse zumindest teilweise an der Plasmamembran stattfinden, ist sie eine der wichtigsten Stukturen in einer Zelle. Insbesondere die Organisation der Plasmamembran ist von großer Bedeutung. Viele Modelle die sich hiermit befassen sind bereits etabliert worden, aber bislang konnte keines davon im System einer lebenden Zelle bestätigt werden. In dieser Arbeit, wird ein "micropatterning" Ansatz verwendet um effektive Proteingrößen in lebenden Zellen zu messen. Hierbei handelt es sich um selektive Immobilisierung von Proteinen direkt in der Plasmamembran lebender Zellen. Den Effekt den solche Protein-reichen Regionen auf ein mit einem Fluorophor markiertes Lipid in der Zellmembran haben, zeichnet sich durch Veränderung des Diffusionsverhalten aus. Dieses hängt einerseits von der Dichte der Proteine und andererseits von deren effektiver Größe ab. Da viele Modelle zur Plasmamembran-Organisation die Assozierung von Lipiden mit (bestimmten) Proteinen als den treibenden Effekt beschreiben, was die effektive Proteingrößen erhöhen würde, kann durch einen Vergleich von bestimmten effektiven Proteingrößen in lebenden Zellen mit entsprechenden Kristallstrukturen eine Aussage über Modelle zur Plasmamembran-Organsation getroffen werden. Algorithmen zur Datenauswertung sind in dieser Arbeit getestet, verbessert und im Rahmen eines in Python geschriebenen Packets zusammengefasst. Dieses ermöglicht eine effiziente Datenanalyse. Weiters, ist die Qualität produzierter "micropatterns" in Hinblick auf ihre Vorbereitung und Stabiltät speziell über Nacht getestet worden, wodurch bestehende Protokolle verbessert werden konnten. Schließlich, sind Proteingrößen für ORAI mit DOPE-PEG100-KK114 als fluoreszent ...